DNA pull down是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具
更新時(shí)間:2022-12-21 點(diǎn)擊次數(shù):762次
DNA Pull Down是一種研究DNA與蛋白互作的方法。其原理是:標(biāo)記的DNA片段結(jié)合在鏈霉親和素磁珠上,再與核蛋白孵育,從而捕獲并純化出與DNA片段互作的蛋白。捕獲的蛋白一方面可以通過(guò)Western blot驗(yàn)證某一特定蛋白是否與靶DNA片段結(jié)合;另一方面也可以進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,篩選出與DNA片段可能互作的蛋白質(zhì)。
鏈霉親和素之間的相互作用是已知的強(qiáng)烈的非共價(jià)相互作用。其中,活化的可以與幾乎所有已知的由蛋白質(zhì)交聯(lián)劑介導(dǎo)的生物大分子偶聯(lián)。因此,用標(biāo)記核酸后,可以利用和鏈霉親和素之間的親和相互作用來(lái)純化多種生物分子復(fù)合物。
DNA下拉實(shí)驗(yàn)從設(shè)計(jì)用于目標(biāo)區(qū)域的DNA探針開(kāi)始,該探針用脫硫標(biāo)記,并與與磁珠偶聯(lián)的鏈霉親和素結(jié)合。細(xì)胞核提取物與珠子-DNA探針一起孵育以純化與目標(biāo)DNA片段結(jié)合的蛋白質(zhì)復(fù)合物,然后將其洗脫以獲得DNA片段的結(jié)合蛋白質(zhì)。
DNA pull down是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術(shù)將標(biāo)記的DNA片段結(jié)合在鏈霉親和素磁珠上,再與細(xì)胞核蛋白孵育,純化出與DNA片段互作的蛋白,洗滌洗脫得到的蛋白產(chǎn)物,做western-blot檢測(cè)特定蛋白是否與靶DNA片段結(jié)合;做質(zhì)譜鑒定即可篩選出與DNA片段可能互作的蛋白信息(如具體某個(gè)或某些轉(zhuǎn)錄因子/組蛋白等)。